Trong chiến lược tạo adenovirus tái tổ hợp mang các gen ngoại lai, cần có một plasmid con thoi (shuttle plasmid) có vai trò trong quá trình trao đổi chéo chuyển gen với DNA của adenovirus.

Plasmid con thoi pShuttle – CMV (Statagene Inc.), sử dụng trong nghiên cứu này, là một vòng DNA kích thước 7,5 kb, có một số điểm cắt của enzyme hạn chế để tiếp nhận “hộp gen kháng nguyên” cài vào, tạo nên vòng DNA tái tổ hợp. Sau đó, DNA plasmid con thoi được đồng nhiễm (trao đổi chéo thành phần gen) với DNA của plasmid adenovirus khung (HAd5) trong tế bào E.coli thích ứng (dòng BJ5183), để tạo ra DNA adenovirus vector tái tổ hợp mới. Từ đó, phần DNA bị cắt bằng PacI sẽ được lây nhiễm tế bào HEK293 để tạo adenovirus mới. Trong công trình này chúng tôi thiết kế plasmid con thoi “mang hộp gen VP2” (VP2 – antigenic cassette). Gen VP2 được thu nhận bằng phản ứng PCR với cặp mồi GKPKZF - GNOR, tách dòng và kiến tạo “hộp gen VP2” có đầy đủ các thành phần có cả chuỗi Kozak và các điểm cắt KpnI và NotI. Đoạn DNA hộp gen VP2), kích thước ~ 8,9 kb được kiểm tra bằng enzyme cắt giới hạn, bằng PCR đặc hiệu gen VP2 và bằng giải trình tự xác định đầu 5’ và 3’ của hộp gen.

Kết quả đã thu được một số pShuttle - CMV chứa hộp gen VP2 để chuẩn bị cho liến tạo plasmid adenovirus tái tổ hợp sau này.