|
|
|
Tinh chế Peroxidase từ củ cải trắng Raphanus sativus var hortensis và ứng dụng trong xét nghiệm ethanol
|
|
|
Đề tài do các tác giả Nguyễn Thanh Thủy, Dương Anh Tuấn, Vũ Nguyên Thành (Viện Công nghiệp Thực phẩm) làm chủ nhiệm.
|
Peroxidase là nhóm enzyme chứa heme, oxy hóa cơ chất sử dụng H2O2 và được ứng dụng rộng rãi trong xét nghiệm sinh hóa. Peroxidase hiện nay chủ yếu được thu nhận từ cải ngựa Amoracia rusticana, một loại cây chỉ mọc ở các vùng ôn đới. Trong nghiên cứu này, peroxidase từ củ cải trắng Raphanus sativus var hortensis được khảo sát tinh chế nhằm mục đích tạo sự thay thế hợp lý về nguồn nguyên liệu.
Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu là củ cải trắng R. sativus var hortensis, đây là loại củ cải dùng cho thực phẩm và được mua từ chợ Hà Nội. Phần củ (400g) được rửa sạch, cắt nhỏ, bổ sung thêm (100ml) đệm Tris-HCl 0,1 M, pH 7,5 và nghiền mịn bằng máy xay sinh tố. Hỗn hợp được ly tâm ở 10000 g trong 10 phút ở 4°C để thu nhận phần dịch trong (dịch enzyme gốc).
Dịch củ cải với hoạt tính peroxidase ban đầu 29 U/ml được tinh chế 190 lần sử dụng các phương pháp kết tủa bằng (NH4)2SO4, sắc ký trao đổi ion và lọc gel. Enzyme thu nhận được có hoạt tính 810 U/ml, hoạt tính riêng 3237 U/mg protein, kích thước phân tử 43 KDa theo SDS-PAGE. Peroxidase từ củ cải trắng được thử nghiệm ứng dụng trong xét nghiệm ethanol dựa trên hệ alcohol oxidase – peroxidase kết hợp với phản ứng tạo màu sử dụng cơ chất 3,3’, 5’5’ –tetramethylbenzidine. Phương pháp enzyme cho phép phát hiện ethanol ở mức 25 ppm. Tương quan tuyến tính được xác định trong dải nồng độ ethanol từ 50 ppm tới 500 ppm. |
Thúy Hằng
Follow Tóm lược theo NCKH của các tác giả Nguyễn Thanh Thủy, Dương Anh Tuấn,… |