Trong nghiên cứu này, nhóm tác giả đã xây dựng phương pháp khuếch đại và tách dòng trọn vẹn các phân đoạn HA, NA và M của virus cúm A/H5N1 từ một số chủng phân lập tại Việt Nam nhằm tạo ra các plasmid tái tổ hợp có chứa trình tự gen HA, NA và M. Các plasmid này có thể sử dụng để giải trình tự nhằm tìm hiểu các biến đổi di truyền của virus cúm A/H5N1 và lưu giữ bảo quản lâu dài để sử dụng trong các nghiên cứu khác.

Các biến đổi di truyền các phân đoạn HA, NA và M của virus cúm A/H5N1 có thể làm thay đổi các đặc tính kháng nguyên, khả năng lây nhiễm, tính kháng thuốc, độc lực và khả năng gây bệnh của virus. Nhóm tác giả đã nghiên cứu một phương pháp mới để khuếch đại và tách dòng trọn vẹn các phân đoạn HA, NA và M của virus cúm A/H5N1. Mẫu RNA của virus cúm A/H5N1 được sử dụng để khuếch đại trọn vẹn các phân đoạn HA, NA và M bằng kỹ thuật RT-PCR (reverse transcription – polymerase chain reaction) hai bước. Kỹ thuật được thực hiện với 3 cặp mồi đặc hiệu được thiết kế trên vùng 3’UTR và 5’UTR không dịch mã (UTR – untranslated region) của các phân đoạn tương ứng. Sản phẩm khuếch đại được điện di kiểm tra và tinh sạch từ thạch agarose, Sau đó được gắn với vector pJET1.2/blunt để tạo plasmid tái tổ hợp chứa trình tự DNA của chủng virus A/H5N1 nghiên cứu. Mười một mẫu bệnh phẩm virus A/H5N1 thu thập từ gia cầm và người được tách RNA làm khuôn thử nghiệm để đánh giá độ tin cậy của phương pháp. Sau khi tối ưu hóa, kỹ thuật RT-PCR đã được ứng dụng để khuếch đại Nghiên cứu phát triển trên kỹ thuật thu nhận và tách dòng trọn vẹn các phân đoạn HA, NA và M  từ 11 mẫu khuôn RNA của virus cúm A/H5N1. Kết quả điện di cho thấy sản phẩm khuếch đại của mỗi phân đoạn của hệ gen là một băng đơn nhất có thể quan sát rõ ràng trên thạch agarose. Sau khi tinh sạch, sản phẩm RT-PCR được gắn vào vector pJET1.2/blunt và chọn lọc tái tổ hợp. Kết quả giải trình tự cho thấy tất cả các trình tự nucleotide đã tách dòng có độ tương đồng cao với trình tự của phân đoạn tương ứng của virus A/H5N1. Kỹ thuật khuếch đại và tách dòng trọn vẹn các phân đoạn HA, NA và M của virus cúm A/H5N1 phân lập từ người và gia cầm đã được xây dựng thành công và có thể ứng dụng trong các nghiên cứu về virus cúm A/H5N1 ở mức độ phân tử.